1996年憑借電視劇《真空愛情記錄》出道，2007年飾演《奮鬥》中的夏琳而獲得了壹定的知名度。2008年與演員文章結婚，兩人育有兩女，同年憑借影片《江北好人》獲得長春國際電影節最佳女主角獎。
2011年，在國劇盛典中獲2011年度最佳女演員。2012年，馬伊琍成為南通城市形象宣傳大使。2015年，與朱亞文***同出演的《北上廣不相信眼淚》榮獲2015年國劇盛典年度十大影響力電視劇。2016年，與文章***同主演諜戰劇《剃刀邊緣》。