沒有引子。莫紮特第40交響曲的第壹個樂句幾乎和同樣沒有引子的貝多芬命運的敲門聲壹樣著名，中提琴擺動的震音背景上方，小提琴歌唱性的主題逐漸展開，猶如夢境中的傾訴，構成這個主題的半音下行，在西方音樂中常常代表嘆息和悲傷，和如同顫抖的中提琴震音相配，建立了憂郁的氛圍。在小提琴的帶領下，木管樂器組(長笛，雙簧管，大管)齊奏進入(14小節，00:16)，緊接著，全樂隊齊奏，悲愴的聲音沖破了憂郁的外殼。第20小節的第二拍上，小提琴再次演奏主題(00:23)，這次的中提琴震音比樂章開始的地方晚進入2小節，接著還有雙簧管和大管的聲音漂浮在弦樂器(小提琴，中提琴，大提琴)的上空，節奏迅速的發展為堅定的步伐，緊張的感覺逐漸加重，樂隊的聲音猶如巨浪在沸騰。經過了壹小節的休止，在44小節(00:49)，第二主題進入，同樣的下行，但是不安和激動卻消失了，溫婉的哀傷占據了主題，長笛和雙簧管再次演奏，很快第壹主題的因素重新出現，緊張感也隨之復活。到了100小節(01:54)，呈示部結束，這時按照慣例，應當加以反復，也就是從樂章的開頭再次演奏剛才的部分。
呈示部反復之後，經過了短暫的過渡開始了發展部，從第103小節(3:50)，雖然我們仍然可以聽到第壹主題的聲音，但是和樂章開始的時候對比，聽覺的感覺發生了很大的改變，這是由於主題從原來的g小調轉到了壹個調性關系上非常遠的升f小調，由於這種調性的轉移，帶給聽眾不穩定的感覺，樂曲此後通過不斷的轉移調性試圖回到原來的g小調，我們將聽到色彩不斷變換的第壹主題。同時大管配以陰郁的和聲，到了113小節(04:05)，大提琴渾厚的聲音演奏主題，帶來了樂隊的爆發，長笛和雙簧管的和聲相當尖銳，小提琴和大提琴聲部交替演奏著主題和伴奏，帶來了整個樂章的高潮，第壹主題被加以變形，出現在各個聲部，低音弦樂器逐漸消失，只剩下小提琴為壹方，長笛，雙簧管為另壹方，互相對話，第壹主題的形狀仍然清晰可聞，大管的和聲充滿了哀怨。到了第152小節(04:48)，樂隊重新激動起來，圓號演奏的節奏宛如心跳，在發展部的結尾，長笛演奏了壹些像是第二主題的音型，沒有展開發展(04:57)。
第164小節(05:02)開始了再現部，再現部就是轉調再次演奏呈示部，並加以變化。第壹主題幾乎是原樣出現，和樂章開頭的不同只是大管的哀怨的和聲。其後我們聽到了和呈示部類似的處理手法，但是在再現部中，主題的種種發展可能被進壹步發掘，再現部長達135小節，幾乎占到了樂章總長的壹半，莫紮特的天才處理手法壹壹得以展示。第壹主題被大大的發展，第二主題的出現絲毫沒有緩解第壹主題的悲傷，反而也同樣顯得憂郁陰沈，樂章結束在不安的想象當中。
第壹樂章是典型的奏鳴曲式，由呈示部，發展部和再現部構成。呈示部有第壹主題和第二主題，兩個主題在聲音上形成對比。發展部對兩個主題加以變化發展，利用主題中提供的動機展開，在這裏莫紮特並沒有發展第二主題，而是強調了第壹主題的悲愴。再現部再次演奏兩個主題，並加以變化。